دانلود مقاله بررسی بیان ژن ein2 در گیاه اطلسی (Petunia×hybrida) و مطالعه نقش تنظیمکنندگی آن در مسیر انتقال پیام اتیلن تحت word دارای 15 صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد دانلود مقاله بررسی بیان ژن ein2 در گیاه اطلسی (Petunia×hybrida) و مطالعه نقش تنظیمکنندگی آن در مسیر انتقال پیام اتیلن تحت word کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
این پروژه توسط مرکز مرکز پروژه های دانشجویی آماده و تنظیم شده است
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی دانلود مقاله بررسی بیان ژن ein2 در گیاه اطلسی (Petunia×hybrida) و مطالعه نقش تنظیمکنندگی آن در مسیر انتقال پیام اتیلن تحت word ،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن دانلود مقاله بررسی بیان ژن ein2 در گیاه اطلسی (Petunia×hybrida) و مطالعه نقش تنظیمکنندگی آن در مسیر انتقال پیام اتیلن تحت word :
مقدمه
اتیلن یک مولکول دوکربنی ساده گازی است که در بسیاری از جنبههای تکوینی و رشد گیاه دخالت دارد .(2)
پیری بافت گل فرآیندی است که اتیلن نقش کلیدی در آن ایفاء میکند. در بسیاری از محصولات با ارزش به لحاظ اقتصادی، سنتز اتیلن در پاسخ به تنشهای مختلف و فرآیندهای تکوینی القاء میشود. همچنین در زمان
گردهافشانی در گیاهان کلیماتریک یک افزایش سریع در سنتز اتیلن مشاهده میشود که بسیاری از فرآیندهای مرتبط با پیری و مرگ سلولی را در گیاهان هماهنگ میکند .(7)
مطالعه بسیاری از گونههای گیاهی نشان داده که مسیر بیوسنتز، دریافت و انتقال پیام اتیلن کاملاً محافظت شده بوده و با واسطه سازوکارهای تنظیمی مناسب در طول
572
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد 26، شماره 4، 1392
چرخه زندگی گیاه به دقت تنظیم میشوند. تا به امروز بررسیها نشان داده که عوامل مختلفی دارای نقش تنظیمی روی فرآیند پیری القاء شده توسط اتیلن میباشند. با این حال اگرچه وجود این نقش تنظیمی اثبات شده است اما سازوکار عمل این فاکتورها در فرآیند پیری در بافت گلبرگ یا اندامهای زایشی گل بهویژه بعد از گردهافشانی مورد مطالعه قرار نگرفته و هنوز به درستی روشن نشده است. بررسی و مطالعات مولکولی اخیر منجر به شناسایی
و درک سازوکار تنظیم تعدادی از ژنهای درگیر در واکنشهای متقابل بین اتیلن با مسیر انتقال پیام سایر هورمونها و فاکتورهایی نظیر قندها، 5) ABA، 16، 17، 32
و (36، اکسین 6)، 42 و (52، سیتوکنین 9)، 11 و (43 و نور (55) گردیده است.
مطالعات ژنتیکی موتانتهای آرابیدوپسیس بهویژه مطالعات اپیستازی نشان داده که رسپتورهای etr1، etr2، ein4، به همراه همولوگ آنها یعنی ers1، ers2 بالادست ژن
ctr1 و بعکس ein2، ein3 ، ein5 و ein6 در پاییندست مسیر انتقال پیام و ژن ctr1 عمل میکنند .(41) آنالیز دقیق این موتانتها، به علاوه جداسازی و تعیین خصوصیات برخی ژنهای مربوطه در حال حاضر یک دید کلی از ماهیت پیچیده مسیر انتقال پیام اتیلن در گیاهان فراهم نموده است. عقیده بر این است که رسپتورهای اتیلن در یک مسیر پیچیده انتقال پیام با ctr1 بهعنوان یک کایناز احتمالی در ارتباط میباشد .(19) به نظر میرسد فعالیت کاینازی ctr1 مربوط به ناحیه C ترمینال پروتئین بوده که با سرین/ترئونین پروتئین کاینازهای خانواده پروتئینی Raf
تشابه دارد .(26) مشابه نقشی که Raf کاینازها در پستانداران دارد، ctr1 احتمالاً یک MAP کایناز کایناز کایناز (MAPKKK) بوده و مهار سیگنال اتیلن احتمالاً از طریق یک آبشار MAPKK و MAPK پیچیده صورت میگیرد 26) و .(30 شواهد اخیر نشان داده که تیمار با پیش ماده اتیلن (ACC) منجر به تحریک آبشار MAPK در آرابیدوپسیس و فعال شدن ctr1 میگردد. این آبشار
احتمالاً پروتئینهای MAPKK، SIMKK، MAPK، MAPK6 و ; را درگیر میکند .(34) با این حال بررسیهای اخیر نشان داده که موتانتهای MPK6، نقص قابل سنجش در مسیر انتقال پیام اتیلن بروز نمیدهند که این موضوع احتمالاً ناشی از کارکرد موازی سایر اجزا مسیر انتقال پیام میباشد. مطالعات قبلی نیز به نقش کلیدی ACC
بهعنوان سیگنال احتمالی اولیه در آغاز فرآیند پیری اشاره کردهاند 49)، 50 و .(51
اعتقاد بر این است که آبشار MAPK به طور مستقیم یا غیرمستقیم، پروتئین غشایی EIN2 را فعال میکند .(34)
پروتئین EIN2 دارای یک ناحیه N ترمینال هیدروفوب میباشد که دارای 12 هلیکس بین غشایی با همولوژی به خانواده پروتئینی NRAMP میباشد. بخش C ترمینال پروتئین ein2، (به جز یک موتیف (Coiled-coil کاملاً منحصر به فرد بوده و هیدروفیلیک میباشد، که نشاندهنده محلول بودن و سیتوزولی بودن آن میباشد. علاوهبراین به نظر میرسد این ناحیه در اثرات متقابل پروتئین-پروتئین در سایر ارگانیسمها نیز نقش دارد .(3) البته تا به امروز ژن
ein2 از گیاهان آرابیدوپسیس (3)، برنج (25)، اطلسی((37،
توتون (میرشمسی و همکاران، مقاله در دست چاپ)، و ذرت (15) جداسازی شده است. کارکرد ein2 در انتقال پیام اتیلن کاملاً شناخته شده نیست. تنها از طریق مقایسات انجام شده با پروتئینهای NRAMP چنین فرض شده است که ناحیه درون غشایی پروتئین EIN2 بهعنوان یک ترانسپورتر کاتیونهای دو ظرفیتی عمل میکند .(3) با این حال، تا به امروز خصوصیاتی مبنی بر اتصال به کاتیونهای فلزی یا ویژگی انتقال یونهای فلزی در این پروتئین شناخته نشده است. موتانتهای نول ein2 غیرحساس به اتیلن بوده، درحالیکه موتانتهایی که ناحیه C ترمینال ein2 در آنها بیش بیان شده بود، پاسخ سهگانه دائم به اتیلن نشان دادند 3) و .(20 این دادهها نشان میدهد که ein2 انتقال پیام اتیلن را موجب شده و تنها زمانی فعال است که اتیلن به رسپتورهای اتیلن باند شده باشد .(3) ناحیه N ترمینال و
573
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد 26، شماره 4، 1392
ناحیه C ترمینال پروتئین EIN2 برای کارکرد این پروتئین ضروریست. این نتایج مبین آن است که ناحیه N ترمینال پروتئین EIN2 برای درک پیام اتیلن از اجزای بالادست مسیر انتقال پیام ضروریست. بعکس ناحیه C ترمینال برای انتقال این سیگنال به اجزای پاییندست مسیر انتقال پیام اتیلن ضروری و کافی است .(3) بررسیهای انجام شده نشان داده که ein2 از طریق یک مکانیسم ناشناخته، فاکتورهای رونویسی خانواده ژنی ein3 را فعال میکند. ژن القاء شونده توسط اتیلن erf1، بهعنوان تنها هدف شناخته شده برای ein3 محسوب میشود. دایمرهای ein3 با یک ناحیه پالیندرومیک تکراری منحصر به فرد در پروموتر erf1
اثر متقابل نشان میدهند و به صورت فعال کننده و مهار کننده رونویسی عمل میکنند .(40) مطالعه و بررسی روی موتانتهایی نظیر ein2 نشان داده که مسیر انتقال پیام اتیلن احتمالاً با سایر مسیرهای انتقال پیام مرتبط با پیری نظیر اکسین (14)، سیتوکنین (10) و جاسمونیک اسید (35)،
آبسزیک اسید (17) هم اثر متقابل دارد. مطالعات انجام شده روی برخی موتانتهای آرابیدوپسیس نظیر abi11،
era31، era33 و شناسایی آللهای موتانت ein2 و ctr-1
شواهدی را فراهم نموده که نشاندهنده وجود اثرات متقابل مسیر انتقال پیام اتیلن با ABA است 5) و .(17 اگرچه نقش ABA در زمان فرآیند پیری گلبرگ در گیاهان حساس به اتیلن نیز هنوز به درستی شناخته نشده است. با این حال در مجموع به نظر میرسد کاربرد ABA خارجی، از طریق القاءء سنتز اتیلن در ژینوئسیوم عمل میکند 31) و .(38 علاوه بر این شواهد به دست آمده اخیر نشان میدهد که سازوکارهای مرتبط با قندها، یک نقش مهم بهویژه در تنظیم اثرات ABA و اتیلن در زمان جوانهزنی بذور، رشد ریشه و فرآیندهای درگیر در پیری و مرگ سلولی بازی میکنند 16) و .(36
آنالیز ژنتیکی موتانتهای gin و glo مسیر انتقال پیام گلوکز را در آرابیدوپسیس و تداخل عمل بین مسیر انتقال پیام هورمونهای گیاهی و گلوکز بهعنوان یک سیگنال اولیه در
بسیاری از فرآیندهای فیزیولوژیک خصوصاً گلدهی و پیری را نشان میدهد 12) و 36 و 39 و .(56 شواهد موجود نشاندهنده نقش تنظیمکنندگی گلوکز بهعنوان یک آنتاگونیست در مسیر بیوسنتز و انتقال پیام اتیلن میباشد
22) و .(56 با این حال تقریباً تداخل عمل اجزای پاییندست مسیر انتقال پیام گلوکز ناشناخته میباشد.
کاربرد خارجی قندها به طور قابل توجهی فرآیند پیری را در گلهایی که فرآیند پیری در آنها حساس به اتیلن است، کند میکند و به تأخیر میاندازد 44) و .(45 در گل میخک، تغذیه گیاه با قند اثر کاربرد اتیلن خارجی را کاهش داد
.(28) بخشی از چنین تأثیراتی احتمالاً ناشی از مهار سنتز اتیلن در گلبرگها به دنبال تیمار با قندها میباشد. در گلهای میخک، ساکارز افزایش فراوانی mRNA تقریباً تمام ژنهای مرتبط با پیری را با تأخیر همراه ساخت. حداقل بخشی از اثر قند علاوه بر مهار ژنهای بیوسنتزی میتواند از طریق کاهش فراوانی mRNA ژن eil3 و پروتئین مرتبط با آن توجیه شود .(21) همچنین بررسیها نشان داده که وجود مقادیر بالای قند میتواند تجزیه فاکتورهای رونویسی ein3
را در پروتئوزومها تشدید کند .(54) علاوه بر ساکارز و گلوکز، سایر قندها نظیر ترهالوز، مانیتول و انیوزیتول نیز موجب تأخیر فرآیند پیری در برخی گونههای گیاهی میشوند. مطالعات انجام شده روی لاله (24)، گلایول 4) و 33 و (53 تأثیر این نوع قندها را در تأخیر فرآیند پیری نشان داده است. کاربرد قندهای خارجی روی فرآیند پیری گلهای غیرحساس به اتیلن، با تأخیر در بیان ژنهای درگیر در جا به جایی مجدد اسیدهای چرب و پروتئین همراه میباشد .(13)
در این تحقیق سعی گردیده تا با مطالعه بیان ژن ein2 در گیاه، نقش و اهمیت ein2، و عوامل احتمالی مؤثر در کنترل چندگانه هورمونی یک فرآیند فیزیولوژیک نظیر پیری و تداخل مسیرهای انتقال پیام آنها با اتیلن مورد بررسی قرار گیرد. البته نحوه بیان این ژن در بافتهای زایشی و رویشی،
574
DNase I (RNase-
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد 26، شماره 4، 1392
شناخت اثرات متقابل با عوامل مختلف و سازوکارهای تنظیمی احتمالی در تصمیمگیری و طراحی راهبرد مناسب در مراحل بعدی این مطالعه تعیینکننده خواهد بود.
مواد و روشها
مواد گیاهی: بذور اطلسی (Petunia×hybrida) در شرایط استاندارد گلخانه، در دمای 24/16 درجه سانتی گراد (شب/روز) و دوره نوری 16/8 (تاریکی/نور) در جعبههای پلاستیکی حاوی مخلوط 30 درصد پیت و پرلیت، 30
درصد ماسه و 40 درصد خاک غنی شده کشت داده شدند.
برای تعیین الگوی بیان و مقایسه مقادیر mRNA ژن ein2
در بخشهای مختلف رویشی و زایشی گیاه نمونهبرداری از بافت برگ، ساقه، ریشه، بخش تحتانی گلبرگ، بخش فوقانی گلبرگ، پرچم، تخمدان، خامه/کلاله و کاسبرگ انجام شد.
گردهافشانی: گلهای باز شده یک روز قبل از گردهافشانی اخته گردید و روز بعد کلاله به طور مصنوعی با انتقال گرده از پرچم گل گردهدهنده گردهافشانی شد. زمان گردهافشانی بهعنوان ساعت صفر نمونهبرداری برای مطالعه مقایسهای تغییرات تجمعی mRNA ژن ein2 در بافتهای گلبرگ و خامه/کلاله در گیاهان گردهافشانی شده و غیر گردهافشانی شده در نظر گرفته شد.
تیمار ACC :گلها یک روز قبل از گردهافشانی از گیاه جدا و بلافاصله بعد از انتقال به تیوبهای حاوی 100 ) ACC
میکرو مولار)، در شرایط محیطی کنترل شده (دمای 25/18
درجه سانتی گراد (شب/روز) و (100Em2s-1 نگهداری شدند. نمونهبرداری از بافت گلبرگ گیاهان تحت تیمار
ACC و شاهد در بازههای زمانی 0، 2، 4، 6 و 24 ساعت بعد از تیمار با حداقل 2 تکرار (سه گل در هر تکرار) انجام شد. برای بررسی نقش مهارکنندگی AgNO3 از غلظت 50
میکرو مولار بهعنوان کنترل در این آزمون استفاده گردید.
تیمار گلوکز: در یک آزمایش جداگانه گلها در زمان گردهافشانی از گیاه جدا و بلافاصله به تیوبهای 1/5 میلی لیتری حاوی آب مقطر یا گلوکز 5 درصد منتقل و در شرایط محیطی کنترل شده مشابه تیمارهای فوق نگهداری شدند. آب مقطر و محلول گلوکز به صورت روزانه تعویض و محلول تازه در طول آزمایش جایگزین گردید.
نمونهبرداری از بافت گلبرگ گیاهان تحت تیمار گلوکز و گیاهان شاهد در بازههای زمانی 0، 24، 48 و 96 ساعت بعد از تیمار انجام شد.
تیمار آبسیزیک اسید :(ABA) گلهای اطلسی در مرحله گردهافشانی از گیاه جدا شده و بلافاصله تحت تیمار ABA
100) میکرو مولار) قرار گرفته و در بازههای زمانی 0، 2، 4 و 6 ساعت بعد از تیمار، نمونهبرداری از بافت گلبرگ گیاهان تحت تیمار آبسیزیک اسید انجام شد.
استخراج RNA و آنالیز کمی بیان ژن : بهمنظور بررسی الگوی بیان ein2 بهعنوان یک فاکتور از مسیر MAP کینازی و نقش آن در فرآیند پیری، الگوی بیان ژن ein2 در بافتهای رویشی و زایشی و تحت تیمارهای مختلف به همراه ژنهای مسیر بیوسنتزی acs2 و acs4 و فاکتور رونویسی
eil1 در پاییندست مسیر انتقال پیام اتیلن مورد آنالیز قرار گرفت. استخراج RNA از نمونههای بافت برگ، ساقه، ریشه، کاسبرگ، گلبرگ (ناحیه فوقانی و تحتانی)، تخمدان، کلاله، میله پرچم، بساک در گیاه اطلسی با استفاده از کیت استخراج (RNeasy Plant Mini Kit QIAGEN) RNA
انجام شد. بهمنظور جلوگیری از تکثیر احتمالی DNA
ژنومی مرتبط با ein2 در واکنشهای شبه کمی RT-PCR،
نمونههای RNA استخراج شده با
Free)، در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه
تیمار شدند. مخلوط واکنش سپس با استفاده از فنل-
کلروفورم تخلیص و با اتانل مطلق رسوب داده شد. کمیت
RNA استخراج شده با استفاده از سنجش جذب نوری در طول موج 260 nm اندازهگیری و بهمنظور تعیین خلوص
575
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران)
آن از الکتروفورز در ژل آگارز 1/2 درصد بافر TBE (0.5×) ولتاژ 100 ولت به مدت 20 دقیقه استفاده شد.
با استفاده از آنزیم نسخهبردار معکوس M-MuLV، رشته
cDNA در واکنشهای 20 میکرولیتری با ترکیب 2
میکروگرم RNA کل نمونههای گیاهی، 100 پیکومول
Oligo (dT)18، 2 میکرولیتر 10 dNTP mix میلی مولار
(غلظت نهایی 1 میلی مولار)، 0/5 میکرولیتر 20) واحد)
بازدارنده RNase، 200 واحد آنزیم M-MuLV و 4
میکرولیتر بافر واکنش (5×) و آب مقطر دیونیزه تا حجم
20 میکرولیتر ساخته شد. واکنشهای PCR در دستگاه ترموسایکلر بیومترا مدل Personal، در حجم 25 میکرولیتر انجام شد. مقادیر موازنه شده از مخلوط واکنش ساخت رشته اول cDNA به هر واکنش PCR وارد شد. برای آنکه شدت باند تکثیر شده در هر واکنش PCR متناسب با مقدار الگوی وارد شده به واکنش باشد، این واکنشها قبل از پایان مرحله تصاعدی تکثیر خاتمه داده شدند. بهمنظور یافتن تعداد دوره مناسب برای تکثیر خطی، واکنشهای PCR با توالی آغازگرهای رفت و برگشت مورد
جلد 26، شماره 4، 1392
دورههای 18، 21، 24، 27 و 30 در تمام آزمایشات انجام شد. افزایش خطی محصول PCR تا چرخه 27 در واکنشها مشاهده گردید. بنابراین در تمام آزمایشات از 27 دوره در برنامه PCR استفاده شد. از کنترل داخلی Ubi3 (مربوط به یوبیکوئیتین) در کمیسازی و مقایسات استفاده شد.
همچنین از نمونههای RNA تیمار شده با DNaseI بهعنوان کنترل منفی در واکنشهای PCR شبه کمی بهمنظور تأیید عدم آلودگی با DNA ژنومی استفاده گردید.
با استفاده از توالیهای ثبت شده ژن ein2 در بانک ژن مربوط به آرابیدوپسیس (AtEIN2, AF141202)، برنج
(OsEIN2, AY396568)، ذرت (zmEIN2, AY359584)،
گوجهفرنگی (LeEIN2, AY566238)، یک جفت آغازگر رفت و برگشت 18 مری با استفاده از نرمافزار Primer Premier v.3.5 طراحی گردید. این جفت آغازگر یک قطعه 326 جفت بازی حدفاصل نواحی 2792 و 3117
انتهای ‘5 ژن را تکثیر مینماید.
استفاده در این مطالعه برای ژنهای
ein2 : 5`-ATTAGCAGGTCTTGGTCG-3` و 5`-GCTCCTTCGGGACTCTAT-3` ،
eil1 : 5`-AGGAAATGGGGTTCTGTG-3` و 5`-GGTAGGACCAACTGGATTAGA-3` ،
acs2 : 5`-TAACCCAAAAGCCTCCAT-3` و 5`-AAGACCGTAGCAGCATAAAT-3` ،
acs4 : 5`-CTACCGTATTCAATCCTCC-3` و 5`-AGTTTCCAAAGTGACATCTC-3` ،
5`-CAGCAGAAGGAAGGGAT-3` : ubi3 و 5`-ACCGCACTCAGCATTAG-3` میباشد.
دناتوراسیون در دمای 94 درجه سانتی گراد به مدت 2 بروماید 0/5 g/ml رنگآمیزی شده و در دستگاه
دقیقه برای دوره اول و در دورههای دوم به بعد به مدت 1 عکسبرداری از ژل مورد بررسی قرار گرفتند. کمی سازی
دقیقه، دمای مرحله اتصال آغازگر با توجه به نوع آغازگرها محصولات PCR به وسیله آنالیز دیجیتال تصاویر و
انتخاب شد و زمان اتصال در تمام چرخهها 1 دقیقه در نظر براساس شدت باندهای تکثیر شده روی ژل آگارز با
گرفته شد، بسط در دمای 72 درجه سانتی گراد به مدت استفاده از نرمافزار (Total lab software Phoretix , 1.10)
75 ثانیه و در دوره آخر به مدت 10 دقیقه انجام شد. انجام شد.
محصولات واکنش PCR تکثیر اختصاصی قطعات DNA نتایج
مورد نظر را در ژل آگارز 1/2 درصد و بافر TBE 0/5×، با
مقایسه بیان ژن ein2 در بافتهای مختلف اطلسی: مقایسه
ولتاژ 75 ولت به مدت 45 دقیقه الکتروفورز گردید.
قطعات DNA تفکیک شده در ژل آگارز در محلول اتیدیوم بیان ژن ein2 با استفاده از روش RT-PCR شبه کمی در
576
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد 26، شماره 4، 1392
بافتهای زایشی و رویشی اطلسی حضور مقادیر مختلف
mRNA ژن ein2 را در سطوح مختلف در این بافتها تأیید نمود (شکل .(1 به طور کلی نتایج حکایت از تجمع بالاتر مقادیر این ژن در بافتهای زایشی نسبت به بخشهای رویشی نظیر برگ، ساقه و ریشه داشت. بررسی و مقایسه بیان ژن ein2 در بافتهای مختلف گل نیز حکایت از سطوح بیان بالاتر mRNA ژن ein2 در ژینئوسیوم (شامل خامه، کلاله و تخمدان) نسبت به سایر بافتهای گل اطلسی داشت.
در بین بافتهای زایشی میزان تجمع نسخههای mRNA ژن
ein2 در پرچم در مقایسه با سایر بافتهای زایشی کمترین بیان را نشان داد (شکل .(1
شکل -1 مقایسه الگوی بیان ژن ein2 در بافتهای رویشی و زایشی اطلسی در مرحله گردهافشانی (ردیف پایین نمایانگر باند حاصل از بیان ژن UBI3 بهعنوان شاهد و استفاده مساوی از mRNA ها در
RT-PCR است).
شکل -2 تغییر بیان ژنهای ein2، eil1، acs2 و acs4 در بافت گلبرگ و خامه/کلاله 24 ساعت بعد از گردهافشانی
تغییر بیان ژن ein2 به صورت بافت-اختصاصی با عمل
گرده افشانی: در این بررسی نقش گرده افشانی بهعنوان یک عامل مهم در فرآیندهای تکاملی و خصوصاً پیری بافت زایشی، در تغییر میزان بیان ژن ein2 مورد مطالعه قرار گرفت (شکل .(2 نتایج نشان داد که بیان ژن ein2 در بافت گلبرگ 24 ساعت بعد از گرده افشانی اختلاف قابل توجهی با گیاهان گرده افشانی نشده نشان نداد. با این حال، تغییرات بیان ژن ein2 در بافت خامه+کلاله کاملاً چشمگیر بود، بهطوریکه بعد از گرده افشانی میزان بیان ژن در خامه+کلاله کاهش پیدا کود (شکل .(2
اشتراک‌گذاری:
دانلود این فایل
لیست کل یادداشت های این وبلاگ
دانلود بررسی ارتباط آموزشهای فنی و حرفه ای رسمی با نیازهای بازار
دانلود مقاله مدیریت کشاورزى تحت word
دانلود پاورپوینت جمعیت شناسی :سازمان ملل متحد تحت word
دانلود آزمایش ثبات رنگ کالاهای نساجی تحت word
دانلود پاورپوینت داروهای روان گردان25 اسلاید تحت word
دانلود پاورپوینت بیوگرافی حسین امانت تحت word
[عناوین آرشیوشده]
